河北农业大学学报

2020, v.43;No.213(05) 80-84

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新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
Establishment and application of a TaqMan probe real-time fluorescence quantitative RT-PCR method for the detection of novel duck reovirus

张博;陈立功;武华;阴雅洁;孟利佳;郭康康;侯绍华;董世山;

摘要(Abstract):

为了快速、准确检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV),本试验采用NDRVσB基因的序列保守区,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了NDRV实时荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验。结果表明:所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线方程为y=-3.354x+44.818,扩增效率为98.7%,标准曲线的相关系数为0.999;该方法可以特异性检测NDRV,但对MDRV、ARV、TMUV、DHAV均无反应信号;该方法检测质粒标准品最低检测浓度为10拷贝/μL,是普通PCR方法检测敏感性的1 000倍;该方法的组内与组间变异系数均小于2%;用该方法检测临床样品,结果显示NDRV阳性率为45%,而常规RT-PCR阳性率为33%,比常规RT-PCR敏感。说明本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法可为NDRV的监测和早期诊断提供可靠的技术支撑。

关键词(KeyWords): 新型鸭呼肠孤病毒;σB基因;荧光定量;RT-PCR;TaqMan探针;应用

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0500806);; 河北省重点研发计划项目(20326622D);; 河北省创新能力提升计划项目(20567668H)

作者(Author): 张博;陈立功;武华;阴雅洁;孟利佳;郭康康;侯绍华;董世山;

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DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0098

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